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Présentation du CRB

Le Centre de Ressources Biologiques Toxoplasma (CRB Toxoplasma) conserve et valorise, dans des règles strictes, des souches et dérivés de Toxoplasma gondii (parasite protozoaire) issus de toxoplasmoses humaines ou animales.

Le CRB Toxoplasma est une structure d’appui au Centre National de Référence (CNR) de la Toxoplasmose pour la récupération de souches isolées à partir de produits pathologiques humains. Ce CNR a pour objectif général de répondre aux besoins exprimés par les gestionnaires de santé, les cliniciens et les biologistes, en termes d’épidémiologie et de diagnostic de la toxoplasmose, mais aussi de soutien aux études portant sur le traitement et la prévention de la toxoplasmose congénitale et de la toxoplasmose chez l’immunodéprimé.

http://cnrtoxoplasmose.chu-reims.fr/

Les souches et dérivés du CRB Toxoplasma sont conservés dans des cryobanques localisées au Pôle de Biologie Territoriale (CHU de Reims).

Les principales missions du CRB Toxoplasma sont :

  • La constitution d’une collection patrimoniale de souches de Toxoplasma gondii sous assurance qualité certifiée,
  • La caractérisation des souches conservées et leur documentation clinique et épidémiologique,
  • La cession de ressources biologiques à la communauté scientifique et/ou aux industries du domaine de la santé ou de la biotechnologie,
  • La proposition des solutions de traitement et de stockage en prestation de service.

Dans ce cadre, le CRB Toxoplasma exerce les activités suivantes :

  • Réception d’isolats, issus du soin ou de l’environnement, et recueil de leurs données associées,
  • Multiplication des souches en culture cellulaire ou par bio-essai,
  • Caractérisation génotypique des souches,
  • Conservation des souches et de leurs dérivés dans des conditions garantissant leur intégrité de longue durée,
  • Cession des ressources biologiques aux demandeurs sur avis favorable d’un conseil scientifique.

Offres de la banque

  • Réception et traitement des souches :

À réception, les souches sont contrôlées et intègrent le CRB Toxoplasma selon ses critères d’acceptation. Les souches sont toutes caractérisées par génotypage sur 15 marqueurs microsatellites. Les souches sont conservées sous forme bradyzoïtes (kystes) ou tachyzoïtes. Pour certaines souches, dont celles du catalogue, de l’ADN est extrait pour être conservé également.

  • Cryoconservation sécurisée :

Les souches sont conservées en cryotubes (1,5 mL) dans des cuves d’azote liquide (-196°C), les ADN (50 à 300µL) en microtubes dans des enceintes réfrigérées (-80°C). Chaque cryotube contient un nombre défini de parasites (suspensions de tachyzoites ou kystes).

  • Gestion des données :

Une base de données permet l’enregistrement des données associées et l’emplacement des souches et ADN dans les enceintes de conservation.

  • Mise à disposition :

Lors de l’examen d’une demande, le Conseil Scientifique approuve et/ou oriente les utilisateurs dans le choix des souches et/ou ADN en fonction des travaux de recherche décrits. À la signature du contrat de mise à disposition, les Ressources Biologiques sont envoyées à température maîtrisée. Il est demandé aux utilisateurs de citer le CRB Toxoplasma dans les publications dans lesquelles les souches et/ou ADN sont utilisés.

L’équipe

MEMBRES DE L’ÉQUIPE:

  • Pr Isabelle VILLENA : Responsable Scientifique du CRB Toxoplasma
  • Dr Dominique AUBERT : Responsable Opérationnel du CRB Toxoplasma
  • Mme Camila ROCABOY : Responsable qualité du CRB Toxoplasma
  • Mme Naïma ORTIS : Technicienne du CRB Toxoplasma

CONSEIL SCIENTIFIQUE :

  • Dr Dominique AUBERT: Maître de Conférences de Parasitologie-Mycologie – Responsable Opérationnel du CRB Toxoplasma – Pôle de Biologie Territoriale du CHU de Reims
  • Dr Marie-France CESBRON: Directeur de Recherche, équipe « Membrane biogenensis of Apicomplexa in Malaria and Toxoplasmosis » – Université de Grenoble Alpes
  • Pr Marie-Laure DARDE: Professeur de Parasitologie-Mycologie – Université de Limoges
  • Dr Ali HAKIMI: Directeur de Recherche, équipe « Host-Pathogen interactions and Immunity to infections » – Université de Grenoble Alpes
  • Pr Laurence LACHAUD: Coordonnateur du Département de Parasitologie-Mycologie – Université de Montpellier
  • Dr Aurélien MERCIER: Maître de Conférences Parasitologie-Mycologie – Université de Limoges
  • Pr Hervé PELLOUX: Professeur de Parasitologie-Mycologie – CHU Grenoble Alpes
  • Pr Isabelle VILLENA: Professeur de Parasitologie-Mycologie – Responsable Scientifique du CRB Toxoplasma – Pôle de Biologie Territoriale du CHU de Reims

La collection

Description

Les souches de Toxoplasma gondii sont isolées à partir de prélèvements pathologiques humains recueillis lors de toxoplasmose congénitale, toxoplasmose de l’immunodéprimé, toxoplasmose acquise ou de tissus animaux.

La collection est constituée de plus de 1000 souches provenant de différents pays à travers le monde.

Le catalogue en ligne propose plusieurs types de souches et ADN reflétant la diversité génétique du parasite :

  • Des souches de référence (lignées clonales de Toxoplasma gondii). Exemple : RH, Me49, PRU, VEG,
  • Des souches sélectionnées pour leur appartenance aux 16 haplogroupes actuellement décrits pour Toxoplasma gondii, dont des souches atypiques (en dehors des lignées clonales).

Génotypage des souches de Toxoplasma gondii

La caractérisation génétique des souches fait appel à une méthode de haute résolution basée sur le polymorphisme de longueur de 15 marqueurs microsatellites (1). De plus, 22 souches disponibles au catalogue du CRB Toxoplasma ont fait l’objet d’un séquençage complet (2). L’appartenance à un haplogroupe a été défini par séquençage d’introns (3).

doi: 10.1038/ncomms10147

Références bibliographiques :

  1. Ajzenberg D, Collinet F, Mercier A, Vignoles P, Dardé ML. Genotyping of Toxoplasma gondii isolates with 15 microsatellite markers in a single multiplex PCR assay. J Clin Microbiol. 2010 Dec ; 48 (12) : 4641-5. Epub 2010 Sep 29. PubMed : 20881166 ; PubMed Central : PMC3008440 
  2. Lorenzi H, Khan A, Behnke MS, Namasivayam S, Swapna LS, Hadjithomas M, Karamycheva S, Pinney D, Brunk BP, Ajioka JW, Ajzenberg D, Boothroyd JC, Boyle JP, Dardé ML, Diaz-Miranda MA, Dubey JP, Fritz HM, Gennari SM, Gregory BD, Kim K, Saeij JP, Su C, White MW, Zhu XQ, Rosenthal BM, Grigg ME, Parkinson J, Liu L, Kissinger JC, Roos DS, David Sibely L. Local admixture of amplified and diversified secreted pathogenesis determinants shapes mosaic Toxoplasma gondii genomes. Nat Commun. 2016 Jan 7; 7:10147. doi:10.1038/ncomms10147
  3. Su C, Khan A, Zhou P, Majumdar D, Ajzenberg D, Dardé ML, Zhu XQ, Ajioka JW, Rosenthal BM, Dubey JP, Sibley LD. Globally diverse Toxoplasma gondii isolates comprise six major clades originating from a small number of distinct ancestral lineages. Proc natl Acad Sci U S A. 2012 Apr 10; 109(15):5844-9. doi: 10.1073/pnas.1203190109

Contrôles qualité

Les souches disponibles au catalogue sont soumises à :

  • Un contrôle de détection des mycoplasmes par PCR (Mycoplasma arginini, Mycoplasma fermentens, Mycoplasma ominis, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale, Mycoplasma salivarium),
  • Un contrôle du génotypage avant congélation des isolats multipliés en culture cellulaire.

Engagement qualité et impartialité

Le CRB Toxoplasma, soucieux des besoins et attentes de ses parties intéressées est certifié selon les normes ISO 20387 et ISO 9001. Certificat disponible ici.

L’impartialité et l’intégrité font partie intégrante du système de management de la qualité du CRB Toxoplasma.