Précautions d’utilisation
Les souches sont envoyées congelées en carboglace. Nous vous recommandons de les traiter (inoculation à la souris ou mise en culture) très rapidement après leur arrivée. Si la souche ne peut être traitée immédiatement, nous vous recommandons de la stocker en azote liquide (T°<130°C) ou, pour une courte période (1 à 5 jours), dans un congélateur entre -70°C et -80°C. Les souches ne sont stables à long terme que conservées à une température inférieure à -130°C. Ne jamais conserver les toxoplasmes congelés à -20°C, même pour une courte période.
Les ADN sont envoyés à température réfrigérée. Nous vous recommandons de les stocker à -20°C pour une courte période ou à -80°C pour une longue période.
Précautions de sécurité
Nous vous recommandons vivement d’utiliser des gants thermoprotecteurs ainsi qu’un masque intégral pour la manipulation des cryotubes. En effet, des cryotubes peuvent fuir quand ils sont immergés dans l’azote liquide. A la décongélation, la surpression due à l’évaporation de l’azote liquide contenue dans le cryotube peut provoquer son explosion, avec des conséquences potentiellement graves de brûlures, voire de blessures par projection de débris coupants.
Conseils de mise en culture cellulaire des tachyzoïtes
1. Décongeler rapidement (≤ 2 minutes) le cryotube dans un bain thermostaté à 37°C
2. Homogénéiser par 2 retournements
3. Décontaminer le cryotube à l’éthanol 70%
4. Transférer le contenu dans un flacon de culture cellulaire 25 cm² contenant les cellules hôtes dans le milieu de culture choisi (RPMI ou IMDM).
5. Incuber la culture dans une étuve réglée à 37°C, 5% CO2
Si kystes tissulaires : réaliser une technique d’isolement et de purification des kystes, afin d’infester les cellules hôtes avec le stade parasitaire bradyzoïte de Toxoplasma gondii.
Néanmoins, il est préférable de ré-inoculer les kystes tissulaires pour optimiser les chances de reprise.
Conseils pour inoculation à la souris
1. Décongeler rapidement (≤ 2 minutes) le cryotube dans un bain thermostaté à 37°C
2. Homogénéiser par 2 retournements
3. Décontaminer le cryotube à l’éthanol 70%
4. Transférer le contenu du cryotube dans 6 ml d’une solution NaCl 9‰
5. Centrifuger 10 minutes à 900g
6. Inoculer le culot à 3 souris Swiss maximum
7. Surveiller quotidiennement les souris. L’évolution de l’infection peut varier en fonction de la virulence des souches.
Conseils d’entretien en culture cellulaire
Changer le milieu tous les 3-4 jours
Milieu complet recommandé : Milieu RPMI (cellules en suspension) ou IMDM (cellules adhérentes) supplémenté avec 2% de Sérum de Veau Foetal décomplémenté et filtré, 1% Penicilline (10000U/mL)-Streptomycine (10000µg/mL)
Incubation en étuve 37°C, 5%CO2